產(chǎn)品描述

信使核糖核酸（mRNA）在細(xì)胞質(zhì)中啟動(dòng)蛋白質(zhì)翻譯，不需要進(jìn)入細(xì)胞核，可實(shí)現(xiàn)比DNA轉(zhuǎn)染更快的蛋白表達(dá)，且避免基因整合風(fēng)險(xiǎn)。

EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑是一種結(jié)合了陽(yáng)離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點(diǎn)的轉(zhuǎn)染試劑，協(xié)同促進(jìn)轉(zhuǎn)染復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，隨后在胞質(zhì)中釋放，能夠在多種細(xì)胞類(lèi)型中實(shí)現(xiàn)高效、低毒的轉(zhuǎn)染效果。

訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期 6 個(gè)月；-30℃至-10℃保存，有效期12個(gè)月。注：避免反復(fù)凍融。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表 1）

1． 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-80% 為佳。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無(wú)血清) 重懸細(xì)胞，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為60-80%。

2． 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物

(1)  對(duì)于每孔細(xì)胞，將 0.5 μg待轉(zhuǎn)染mRNA加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與mRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無(wú)血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

(3)  30 min后，往上述復(fù)合物中加入250 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無(wú)血清)，輕輕混勻。

3． 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1)  細(xì)胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物加入每孔細(xì)胞。

(2)  在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，無(wú)需更換新的培養(yǎng)液，之后即可檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果。若需更長(zhǎng)時(shí)間轉(zhuǎn)染，可在轉(zhuǎn)染12 h后補(bǔ)充500 μL培養(yǎng)基 (含血清)，總體積達(dá)到 500μL，即達(dá)到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量，12-36 h后再進(jìn)行檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1.    本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.    mRNA質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高純度、無(wú)菌、無(wú)污染、無(wú)內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)mRNA?？梢酝ㄟ^(guò)對(duì)mRNA進(jìn)行加帽(相比于Cap0結(jié)構(gòu)，帶有Cap1 結(jié)構(gòu)的mRNA對(duì)于哺乳動(dòng)物系統(tǒng)更適合)，使用N1-甲基-假尿苷修飾和添加poly(A)尾，以增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性和壽命。

3.    整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程使用無(wú)RNA酶和無(wú)熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

4.    細(xì)胞條件：細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長(zhǎng)狀態(tài)，建議使用生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5.    細(xì)胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要求采用無(wú)血清轉(zhuǎn)染體系(推薦使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基)，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成及mRNA轉(zhuǎn)染效率。

6.    由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會(huì)抑制陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，因此建議測(cè)試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。

7.    試劑用量的優(yōu)化：RNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，初次使用應(yīng)優(yōu)化mRNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑用量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。通常情況下，24孔板的推薦mRNA用量為0.2-1 μg，轉(zhuǎn)染試劑推薦用量為2-4 μL。建議初次使用時(shí)，可在推薦范圍內(nèi)進(jìn)行不同用量的預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化轉(zhuǎn)染效果。

表 1：不同培養(yǎng)體積對(duì)應(yīng)的待轉(zhuǎn)mRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

注：該表使用量?jī)H供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物所需培養(yǎng)基的量；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物的培養(yǎng)基的量。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。